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小反芻獸疫病毒熒光RT-PCR檢測試劑盒說明書獸用本試劑盒適用于羊的扁桃體、淋巴結和脾臟等組織病料和血液等液體病料中的小反芻獸疫病毒(PPRV)核酸檢測。編號名稱裝量編號名稱裝量PPRV 01-q48PPRV qRT-PCR mix48管/盒PPRV 03-q48陽性對照20µlx8管/盒PPRV 02-q48PPRV qRT-PCR Buffer1000μlPPRV 04-q48陰性對照1000μl【保存期】 -20℃冷凍保存,有效期12個月。【規格】 48檢份/盒【使用方法】1、樣品采集、處理和病毒核酸提取樣品參照《小反芻獸疫診斷技術》(GB/T 27982-2011)(www.uchjz.tw下載中心)進行處理。使用核酸提取試劑盒則參照說明書處理樣品。陽性對照在每個薄壁PCR反應管中加入20μlqRT-PCR Buffer復溶后直接使用,陰性對照與樣品同步同樣進行處理。2、qRT-PCR反應體系的配制每個反應體系20μl。在每個薄壁PCR反應管中加入18µl PPRV qRT-PCR Buffer進行復溶,然后加入2µl樣品RNA、陽性對照和陰性對照RNA,標記并做好記錄。3、qRT-PCR反應程序的設置1)48 ℃ 10 min;2)94 ℃ 3 min;3)94℃ 10s,60℃ 30s,共40個循環;設置60℃收集FAM熒光信號。【結果判定】1)陽性對照的Ct值小于等于28.0,同時陰性對照無Ct值且無擴增曲線,實驗結果成立。2)被檢樣品Ct值小于等于30.0,且出現擴增曲線,為小反芻獸疫病毒核酸陽性;被檢樣品Ct值大于等于40.0,判定為陰性;被檢樣品Ct值大于30.0小于40.0為可疑,需重新提取核酸重復檢測仍為可疑則判定為陽性。【注意事項】1、本試劑盒說明書未單獨說明的事項,均參照《小反芻獸疫診斷技術》(GB/T 279...
小反芻獸疫病毒熒光RT-PCR檢測試劑盒說明書(50頭份) 【組分與用法】編號名稱裝量用法保存條件1反應陽性對照30 μl/管 ×1管直接使用-20°C保存2熒光RT-PCR反應液1075 μl/管 ×1管直接使用-20°C保存3酶混合液25 μl/管 ×1管直接使用-20°C保存 【未提供但是需要準備的試劑和耗材】1  無RNase的純水。2  無RNase/DNase 的PCR反應管、Tips和1.5ml離心管等。 【作用與用途】用于檢測多種臨床樣本(如鼻腔/口腔拭子、眼拭子以及淋巴結、脾、腎、直腸、結腸、肺等組織)中是否含小反芻獸疫病毒核酸。 【用法與判定】1  樣本處理  可采用RNA純化試劑盒手工提取或全自動核酸提取儀提取各類樣本中的RNA。如在2小時內檢測則提取的RNA置于冰上保存,否則置于﹣70ºC冰箱保存。2  擴增試劑準備  配制反應體系前,務必使熒光RT-PCR反應液完全溶解,并顛倒混勻幾次,然后瞬時離心。每份被檢樣品使用1個PCR管,每管中依次加入:熒光RT-PCR反應液21.5 μl(含ROX參比熒光,可用于ABI 7500熒光PCR儀。其他熒光PCR儀無需要設置參比熒光),酶混合液0.5 μl,被檢樣品中提取的RNA溶液3 μl。每次檢測需設置陽性對照和陰性對照(加3 μl)。陽性對照使用反應陽性對照品作為模板,陰性對照使用無RNA酶的純水作為模板。3  RT-PCR反應  加樣后,將PCR管置于熒光PCR儀內進行如下反應:50ºC反轉錄15 min;95ºC,3 min;然后進行40個循環的PCR擴增,擴增條件為94ºC 15s,...
小反芻獸疫病毒RT-PCR檢測試劑盒說明書(50頭份) 【組分與用法】編號名稱裝量用法保存條件1反應陽性對照品30 μl/管 ×1管直接使用-20°C保存2RT-PCR反應液1050 μl/管 ×1管直接使用-20°C保存3酶混合液50μl/管 ×1管直接使用-20°C保存【未提供但是需要準備的試劑和耗材】1  無RNase的純水,購買或自己制備。2  無RNase/DNase的PCR反應管、Tips和1.5 ml離心管等【作用與用途】用于檢測各種臨床樣本(如鼻腔/口腔拭子、眼拭子、淋巴結、脾、腎、直腸、結腸、肺等)中是否含小反芻獸疫病毒核酸。【用法與判定】1  樣本處理  可采用Roche、QIAGEN等公司生產的手工RNA純化試劑盒或其他全自動核酸提取儀提取各類樣本中的RNA。如在2小時內檢測則提取的RNA置于冰上保存,否則置于﹣80ºC冰箱保存。2  擴增試劑準備  配制反應體系前,務必使RT-PCR反應液完全溶解,并顛倒混勻幾次,然后瞬時離心。每份被檢樣品使用1個PCR管,每管中依次加入:RT-PCR反應液21μl,酶混合液1μl,被檢樣品中提取的RNA溶液 3μl。每次檢測設置標準陽性對照和標準陰性對照(加3μl)。標準陽性對照用反應陽性對照品作為模板,而標準陰性對照用無RNase的純水作為模板。3  RT-PCR反應  加樣后,將PCR管置于PCR儀內進行如下反應:50ºC,反轉錄30 min;然后94ºC, 2 min進行Taq酶的激活;接著進行35個循環的PCR擴增(擴增條件為94ºC, 20 sec,58ºC, 30 sec,72ºC, 30 sec...
病毒基因組DNA/RNA提取試劑盒獸用本試劑盒適用于動物體液、分泌物及組織中病毒核酸的提取,可同時提取樣本中的DNA和RNA;提取的核酸可直接用于后續的PCR或RT-PCR實驗。編號名  稱裝  量保  存25檢份/盒50檢份/盒NAE 01消化液13 ml×1瓶26 ml×1瓶室溫NAE 02抑制物去除液12.5 ml×1瓶25 ml×1瓶室溫NAE 03漂洗液5 ml×1瓶10 ml×1瓶室溫(使用前加無水乙醇)NAE 04蛋白酶 K500μl×1管1ml×1管2~8℃保存NAE 05Nuclease-free 水14 ml×1瓶28 ml×1瓶室溫NAE 06核酸吸附柱和收集管25套50套室溫【保存期】  有效期12個月。【規格】 (1)25檢份/盒 (2)50檢份/盒【使用方法】1、樣品采集處理1.1 血清、血漿和淋巴液等無細胞體液樣本采集:1.1.1血清采集:采集血液后應立即置于4℃冰箱中待血清析出。1.1.2血漿采集:需用EDTA抗凝劑抗凝血分離。1.2 拭子樣本采集:采集拭子樣本時采用專用拭子采集口咽分泌物、體液分泌物。1.3 組織樣本采集:氣管、肺、喉頭、脾臟、扁桃體、腎臟和淋巴結等。1.3.1組織樣品處理:選取病變明顯的組織塊剪取樣品約20mg(可選擇多部位剪碎混勻后再取,1粒大米重約20mg,組織取樣量切忌太多,影響),依次加入150μl消化液、450μl Nuclease-free水和20μl蛋白酶K,用眼科剪反復多次剪碎混勻或用電動勻漿器勻漿,置56℃水浴中消化15~30分鐘(視消化情況)后離心取上清。2、病毒DNA/RNA提取2.1 取上述處理后樣本離心取上清100μl轉入1.5ml離心管,加入300μl消化液...
偽狂犬病毒gB基因熒光PCR檢測試劑盒說明書獸用本試劑盒適用于動物肺、扁桃體、淋巴結等組織病料和血液等液體病料中的偽狂犬病毒gB基因(PRV)核酸檢測。編號名稱裝量編號名稱裝量PRVgB 01-q48PRVgB qPCR mix48管/盒PRVgB 03-q48陽性對照20µlx8管/盒PRVgB 02-q48PRVgB qPCR Buffer1000μlPRVgB 04-q48陰性對照1000μl【保存期】  -20℃冷凍保存,有效期12個月。【規格】 48檢份/盒【使用方法】1、樣品采集、處理和病毒核酸提取樣品參照《偽狂犬病診斷技術》(GB/T 18641-2002)(www.uchjz.tw下載中心)進行處理。使用核酸提取試劑盒則參照說明書處理樣品。陽性對照在每個薄壁PCR反應管中加入20μl qPCR Buffer復溶后直接使用,陰性對照與樣品同步同樣進行處理。2、qPCR反應體系的配制每個反應體系20μl。在每個薄壁PCR反應管中加入18μl PRVgB qPCR Buffer進行復溶,然后加入2μl樣品DNA、陽性對照和陰性對照DNA,標記并做好記錄。3、qPCR反應程序的設置1)94 ℃ 3 min;2)94℃ 10s,60℃ 30s,共40個循環;設置60℃收集FAM熒光信號。【結果判定】1)陽性對照的Ct值小于等于28.0,同時陰性對照無Ct值且無擴增曲線,實驗結果成立。2)被檢樣品Ct值小于等于30.0,且出現擴增曲線,為偽狂犬病毒gB基因核酸陽性;被檢樣品Ct值大于等于40.0,判定為陰性;被檢樣品Ct值大于30.0小于40.0為可疑,需重新提取核酸重復檢測仍為可疑則判定為陽性。 【注意事項】1、本試劑盒說明書未單獨說明的事項,均參照《偽狂犬病診斷技術》(GB/T 18641-2002)。2、PCR實驗室應按功能分為...
偽狂犬病毒gE基因熒光PCR檢測試劑盒說明書獸用本試劑盒適用于動物肺、扁桃體、淋巴結等組織病料和血液等液體病料中的偽狂犬病毒gE基因(PRV)核酸檢測。編號名稱裝量編號名稱裝量PRVgE 01-q48PRVgE qPCR mix48管/盒PRVgE 03-q48陽性對照20µlx8管/盒PRVgE 02-q48PRVgE qPCR Buffer1000μlPRVgE 04-q48陰性對照1000μl【保存期】 -20℃冷凍保存,有效期12個月。【規格】 48檢份/盒【使用方法】1、樣品采集、處理和病毒核酸提取樣品參照《偽狂犬病診斷技術》(GB/T 18641-2002)(www.uchjz.tw下載中心)進行處理。使用核酸提取試劑盒則參照說明書處理樣品。陽性對照在每個薄壁PCR反應管中加入20μl qPCR Buffer復溶后直接使用,陰性對照與樣品同步同樣進行處理。2、qPCR反應體系的配制每個反應體系20μl。在每個薄壁PCR反應管中加入18μl PRVgE qPCR Buffer進行復溶,然后加入2μl樣品DNA、陽性對照和陰性對照DNA,標記并做好記錄。3、qPCR反應程序的設置1)94 ℃ 3 min;2)94℃ 10s,60℃ 30s,共40個循環;設置60℃收集FAM熒光信號。【結果判定】1)陽性對照的Ct值小于等于28.0,同時陰性對照無Ct值且無擴增曲線,實驗結果成立。2)被檢樣品Ct值小于等于30.0,且出現擴增曲線,為偽狂犬病毒gE基因核酸陽性;被檢樣品Ct值大于等于40.0,判定為陰性;被檢樣品Ct值大于30.0小于40.0為可疑,需重新提取核酸重復檢測仍為可疑則判定為陽性。【注意事項】1、本試劑盒說明書未單獨說明的事項,均參照《偽狂犬病診斷技術》(GB/T 18641-2002)。2、PCR實驗室應按功能分為配液區、樣品處理區、擴增...
 
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