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偽狂犬病毒gB基因熒光PCR檢測試劑盒

上市日期: 2017-06-26

本試劑盒適用于動物肺、扁桃體、淋巴結等組織病料和血液等液體病料中的偽狂犬病毒gB基因(PRV)核酸檢測。

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偽狂犬病毒gB基因熒光PCR檢測試劑盒說明書

獸用

本試劑盒適用于動物肺、扁桃體、淋巴結等組織病料和血液等液體病料中的偽狂犬病毒gB基因(PRV)核酸檢測。

編號

名稱

裝量

編號

名稱

裝量

PRVgB 01-q48

PRVgB qPCR mix

48/

PRVgB 03-q48

陽性對照

20μlx8/

PRVgB 02-q48

PRVgB qPCR Buffer

1000μl

PRVgB 04-q48

陰性對照

1000μl

【保存期】 ?-20℃冷凍保存,有效期12個月。

【規格】 48檢份/

【使用方法】

1樣品采集、處理和病毒核酸提取

樣品參照《偽狂犬病診斷技術》(GB/T 18641-2002)(www.uchjz.tw下載中心)進行處理。使用核酸提取試劑盒則參照說明書處理樣品。陽性對照在每個薄壁PCR反應管中加入20μl qPCR Buffer復溶后直接使用,陰性對照與樣品同步同樣進行處理。

2qPCR反應體系的配制

每個反應體系20μl。在每個薄壁PCR反應管中加入18μl PRVgB qPCR Buffer進行復溶,然后加入2μl樣品DNA、陽性對照和陰性對照DNA,標記并做好記錄。

3qPCR反應程序的設置

194 3 min294 10s60 30s,共40個循環;設置60℃收集FAM熒光信號。

【結果判定】

1)陽性對照的Ct值小于等于28.0,同時陰性對照無Ct值且無擴增曲線,實驗結果成立。

2)被檢樣品Ct值小于等于30.0,且出現擴增曲線,為偽狂犬病毒gB基因核酸陽性;被檢樣品Ct值大于等于40.0,判定為陰性;被檢樣品Ct值大于30.0小于40.0為可疑,需重新提取核酸重復檢測仍為可疑則判定為陽性。

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【注意事項】

1、本試劑盒說明書未單獨說明的事項,均參照《偽狂犬病診斷技術》(GB/T 18641-2002)。

2PCR實驗室應按功能分為配液區、樣品處理區、擴增區、電泳區。物流方向依次為配液區樣品處理區擴增區電泳區。所有接觸病料的物品、器具,尤其是PCR產物和使用后的電泳緩沖液均應合理處置,以免污染實驗室。

3、所有試劑應在規定條件下儲存。-20℃保存的試劑在使用前應完全融化,振蕩混勻后,置冰盒中取用。使用后如短期內(1個月內)繼續使用可以存放4℃;長期保存放置-20℃;盡量避免反復凍融,反復凍融試劑將減低檢測靈敏度;嚴禁使用超過有效期限的試劑;嚴禁混用不同試劑盒組分。

4、嚴格按照國標和說明書要求操作。正確使用移液器,吸取液體時吸頭盡量在液體上層吸取;做到移液量精準;吸取不同液體時必須更換移液器吸頭,防止試劑組分污染以及樣品污染。

5、試劑盒組分在生產分裝時考慮到液體的損耗,實際裝量略多于標注裝量,因此嚴禁直接在原包裝中配制反應體系,以免造成反應體系各組分比例不準確。

6、每次檢測試驗必須設陽性對照和陰性對照,而且陽性對照和陰性對照必須與待檢樣品同步處理,以驗證提取試劑的提取效率以及是否被污染;驗證qPCR反應體系的擴增效率以及是否被污染;驗證試驗中所用器材是否被污染。

7、試驗操作過程中,操作人員做好個人安全防護,避免直接接觸試劑組分,建議試驗全程佩戴一次性手套。

8、需要自備的儀器:超凈工作臺、離心機、掌型離心機、qPCR擴增儀、電泳儀、電泳槽、凝膠成像儀、4℃冰箱、-20℃冰柜、可調移液器(20μl200μl1000μl)。

9、需要自備的耗材和溶液:1.5ml/2ml RNase-free離心管、瓊脂糖、TAE電泳緩沖液、蒸餾水、500ml量筒、吸頭(10μl/200μl/1000μl)、一次性PE手套或者乳膠手套、油性記號筆。


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